质粒载体的构建步骤
1、通过PCR扩增目的基因片段 PCR要设计引物，设计引物时要选择合适的同源序列，根据质粒载体和基因序列要选择合适的酶切位点，PCR的产物要纯化。
2、目的基因是以生物基因组DNA为模板，设计引物，PCR出来的。目的产物的序列正确后，就可以构建重组载体。主要方法就是酶切目的产物，连接目标载体，转化大肠杆菌感受态，最后鉴定一下单克隆是不是阳性克隆就OK了。
3、操作步骤 步骤简述如下：按照下图中1配制溶液，然后65℃处理后加入3中所配制溶液继续后续反应即可。 连接产物的转化 常用的感受态细胞有DH5α、BL21(DE3)、Rossetta等，而抽提质粒一般用DH5α，可以自己制备也可以购买商业化的感受态。
4、以筛选含有质粒DNA的阳性细菌克隆（菌株）；（3）真核生物的启动子、增强子、终止子、内含子等转录调控元件；（4）编码抗原蛋白的目的基因序列；（5）多聚核苷酸信号序列，以保证mRNA翻译时适时终止。
5、载体构建目的 ①用它作为运载工具，将目的基因转移到宿主细胞中去。②利用他在宿主细胞内对目的基因进行大量的复制（称为克隆）。理想的运载体是质粒(plasmid)，在基因工程中，常用人工构建的质粒作为载体。
6、载体转化系统是目前植物基因工程中使用最多、 机理最清楚、技术最成熟的、最重要的一种转化系统， 其中又以Ti质粒转化载体最为重要。 第一节 植物基因工程载体种类 根据其功能和构建过程，可分为以下种类。
什么是构建载体?
1、载体构建是分子生物学研究常用的手段之一。主要包括已有载体多克隆位点MCS的改造和已有载体启动子、增强子、筛选标记等功能元件的改造。载体构建完成后可利用PCR原理进行测序验证。
2、DNA分子运送到受体细胞中。根据查询分子生物研究所相关资料显示，载体构建是把DNA分子运送到受体细胞中去，必须寻找一种能进入细胞、在装载了外来的DNA片段后仍能照样复制的运载体。载体构建是分子生物学研究常用的手段之一。
3、理想的运载体是质粒(plasmid)，在基因工程中，常用人工构建的质粒作为载体。
过表达载体构建方法
过表达载体构建方法可以通过多种方式来实现，比如使用基因组学、转录组学、蛋白质组学和代谢组学等方法。
当拿到一个基因的DNA片段后，就需要把它导入一个载体，一方面长期保存。另一方面也需要以载体为媒介将基因导入受体细胞中。基因表达载体的构建是基因工程的核心。常用的载体有细菌质粒，噬菌体和动植物病毒。其中质粒载体最常用。
首先要用一定的限制酶切割质粒，使质粒出现一个缺口，露出黏性末端。用同一种限制酶切断目的基因，使其产生相同的黏性末端。
如何构建载体
1、②利用他在宿主细胞内对目的基因进行大量的复制（称为克隆）。理想的运载体是质粒(plasmid)，在基因工程中，常用人工构建的质粒作为载体。
2、过表达载体构建方法可以通过多种方式来实现，比如使用基因组学、转录组学、蛋白质组学和代谢组学等方法。
3、“酶切-连接”方法是通常构建RNA干扰载体最常用的方法，被广泛应用于各种生物之中。其构建过程是：通过PCR方法得到目的基因的片段(添加了合适的酶切位点)，使之正反相连形成顺式片段和反式片段。
